液相色譜定性/定量分析
 

在定性的基礎(chǔ)上定量,需有純物質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)物液相色譜定量是相對(duì)定量的方法:即由已知量的純標(biāo)樣推算混合物中被測(cè)物的量定量的依據(jù)是:

a）被測(cè)組分的量與響應(yīng)值(峰高或峰面積)成正比

b）由已知量的標(biāo)樣可求得定量校正因子

c）定量校正因子:是定量計(jì)算公式中的比例常數(shù),其物理意義是單位響應(yīng)值(峰面積)所代表的被測(cè)組分的量

d）測(cè)定未知組分的響應(yīng)值,通過(guò)定量校正因子即可求得其含量
 

常用的定量方法

外標(biāo)法：在液相色譜中用得zui多

內(nèi)標(biāo)法：準(zhǔn)確，但是麻煩，在標(biāo)準(zhǔn)方法中用得zui多

鑒別需定量的色譜峰(定性)

色譜峰定性鑒別每個(gè)要定量的色譜峰

首先用標(biāo)樣確定欲定量之色譜峰的保留時(shí)間(Rt)，通過(guò)比較保留時(shí)間,找到未知樣中各色譜峰所對(duì)應(yīng)的組份，色譜定性是用與標(biāo)樣比較保留時(shí)間的方法，判據(jù)并不充分進(jìn)一步的確認(rèn)(定性)
1、標(biāo)準(zhǔn)加入法

2、同時(shí)用其它方法：其它色譜方法(改變機(jī)理,如:用不同的色譜柱) 
3、其它儀器方法

液相色譜定量分析的步驟

1、選擇一個(gè)適合定量分析的色譜方法：
a）首先確認(rèn)被檢測(cè)組分峰,并達(dá)到分離度(R)大于1.5

b）被確定被測(cè)組分色譜峰的一致性(純度)

c）確定方法的檢測(cè)限及定量限;靈敏度及線(xiàn)性范圍

2、建立校正曲線(xiàn)需用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品

3、檢驗(yàn)定量方法的準(zhǔn)確度及精密度

4、用相應(yīng)的色譜管理軟件實(shí)施樣品采集,數(shù)據(jù)處理及報(bào)告結(jié)果
 

確認(rèn)色譜峰的一致性(純度)

確保每個(gè)峰下只有一個(gè)被測(cè)的組份（不能重合峰）

檢查是否有共流出的物質(zhì)（雜質(zhì)）干擾
 

色譜峰一致性(純度)確認(rèn)的方法

用液相檢測(cè)器比較譜圖

峰純度鑒定

影響定量分析結(jié)果的因素

準(zhǔn)確度不好可能由下述原因造成:

–峰面積積分不正確、樣品分解或制樣時(shí)導(dǎo)入雜質(zhì)、樣品瓶不密封,樣品或溶劑揮發(fā)、制樣不正確、進(jìn)樣問(wèn)題、內(nèi)標(biāo)制備不正確

精密度不好可能的原因:

峰積分不正確、進(jìn)樣或進(jìn)樣器有問(wèn)題、樣品分解或制樣時(shí)引入了雜質(zhì)、色譜本身問(wèn)題、檢測(cè)器靈敏度下降